Sådan fryse-tørre en bakteriel kultur (lyofilisering)

Lyofilisering, eller frysetørring, er en kort laboratorieprocedure

Frysetørring, også kaldet lyofilisering eller kryosiccation, er processen med at fjerne vand fra et produkt, efter at det er frosset (og derefter anbragt under et vakuum), hvilket gør at is kan skifte fra et fast stof til en damp uden at gå gennem en flydende fase. Is (eller andre frosne opløsningsmidler) fjernes fra et produkt gennem sublimeringsprocessen, og bundne vandmolekyler fjernes gennem desorptionsprocessen.

Grundlæggende om lyofilisering

En af de bedste måder at opbevare en bakteriel, svampe-, gær- eller anden mikroorganiskultur på i lange perioder er at anvende frysetørringsprocessen. Denne korte laboratorieprocedure kan udføres med enhver kommercielt tilgængelig frysetørrer, der bevarer din kultursamling. Fordi lyofilisering er den mest komplekse og dyre form for tørring, er processen sædvanligvis begrænset til sarte, varmefølsomme materialer af høj værdi. Stoffer, der ikke er beskadiget ved frysning, kan normalt frysetørres, så køleopbevaring er unødvendig.

Denne proces kan tage så lidt som tre timer, og så længe som 24 timer, ikke med kulturvækst.

Steg-for-trin-processen for lyofilisering

1. For det første dyrke en overnatningskultur eller græsplæne, af mikroorganismen på LB eller anden passende næringsmiddelagarplade.

2. Derefter tilberedes sterile hætteglas med hætteglas ved autoklavering i forvejen, med kapperne (gummipropper) placeret løst på toppen. Anbring papiretiketter trykt med kulturens identifikation inde i rørene før autoklavering. Alternativt kan du bruge rør med hætter designet til sterilitet .

1. Tilsæt 4 ml lyofiliseringspuffer til pladen. Om nødvendigt kan cellerne suspenderes ved anvendelse af en steril glasstang.

2. Overfør hurtigt kultursuspensionen til de steriliserede hætteglas. Tilsæt ca. 1,5 ml pr. Hætteglas. Tætning med gummikappen.

3. Frys kultur suspensionen inde i hætteglassene ved at placere hætteglassene i en -20 grader Celcius fryser.

1. Når kulturen er frosset, skal du forberede frysetørret ved at tænde det og lade tid for passende temperatur- og vakuumbetingelser stabilisere sig. Gør dette i henhold til producentens anvisninger for det bestemte mærke med frysetørrer, du bruger.

2. Læg hætteglassene forsigtigt og aseptisk løst oven på hætteglassene, så fugt kan undslippe under frysetørringsprocessen, og læg hætteglassene i et frysetørrerrum. Påfør vakuumet i kammeret i henhold til producentens anvisninger.

3. Lad kulturtiden helt frysetørre (tørre ud). Dette kan tage fra et par timer til natten afhængigt af mængden af ​​hver prøve og hvor mange prøver du har.

4. Fjern prøverne fra frysetørrerkammeret i overensstemmelse med producentens anvisninger, og forsegl hætteglasene forsigtigt med gummikappen og derefter krympetoppen.

5. Opbevar den frysetørrede kulturopsamling ved stuetemperatur.

Produkter, du har brug for

• Freeze-tørretumbler
• Næringsstof eller andre egnede agarplader (og inkubator til dyrkningskultur)
• Glasstang
• Lyofiliseringsbuffer
• Crimp-top hætteglas med gummipropper (og en crimper til at anvende hætten)
• Fryser

<sub>Reference:

SP Scientific. Grundlæggende principper for frysetørring. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>