Grundlæggende om frysetørringskulturer (lyofilisering)
Lyofilisering, også kendt som frysetørring, er en proces, der anvendes til konservering af biologisk materiale ved at fjerne vandet fra prøven, hvilket indebærer første frysning af prøven og derefter tørring af det under vakuum ved meget lave temperaturer. Lyofiliserede prøver kan opbevares meget længere end ubehandlede prøver.
Hvorfor lyofilisering anvendes
Lyofilisering eller frysetørring af bakteriekulturer stabiliserer kulturerne til langtidsopbevaring, samtidig med at man minimerer den skade, der kan skyldes, at prøven strengt tørres.
Mange mikroorganismer overlever godt, når de frysetørres og kan let rehydreres og dyrkes i kulturmedier efter længere tids opbevaring.
Lyofilisering anvendes også i bioteknologi og biomedicinske industrier for at bevare vacciner, blodprøver, rensede proteiner og andet biologisk materiale.
Denne korte laboratorieprocedure kan bruges sammen med enhver kommercielt tilgængelig frysetørrer til at bevare din kultursamling.
Lyofiliseringsprocessen
Lyofiliseringsprocessen er faktisk en anvendelse af et fysisk fænomen kaldet sublimering: overgangen af et stof fra fast til en gasformig tilstand uden først at passere gennem væskefasen. Under frysetørring fjernes vandet i den frosne prøve som vanddamp uden først at optøbe prøven.
Almindelige fejl
Et af de mest almindelige fejl når det kommer til lyofilisering er ikke at vide din prøve smeltepunkt, hvilket gør det svært at vælge den rigtige lyofilisator.
Dine prøver kan smelte under processen. En anden almindelig fejl er at tænke koldere er bedre, når fryse-tørring på en hylde-type frysetørrer. Under primær tørring bør du indstille hyldetemperaturen lige under prøveens eutektiske temperatur. Der bør være lige nok varme til at tilskynde prøveens molekyler til at bevæge sig - men forhindre smeltning.
En tredje fejl bruger det forkerte udstyr til dine prøver. Fordi frysetørrere anvendes i en gruppeindstilling, skal du vide følgende før du køber en:
- Hvor meget fugt vil blive lyofiliseret
- Hvad prøven er (og den eutektiske temperatur)
- Hvordan man korrekt bruger frysetørrer
Hvis enheden ikke anvendes korrekt, kan det ødelægge alle prøverne. Hvilket bringer os til en anden almindelig fejl: Vedligeholdelse af vakuumpumpen. Pumpen skal være i god stand for lyofilisering til arbejde. Ved at køre pumpen med gasballasten åben 30 minutter før og efter fryseprocessen vil pumpens levetid øges. Åbning af gasballast fjerner forureninger ud af pumpen for at forhindre skade på interne komponenter. Du bør kontrollere pumpens olie ofte for misfarvning og partikler, og skift olien efter behov. Regelmæssige olieskift holder pumpen trukket i optimal vakuum under frysetørreprocessen.
Endelig kan det også være en stor fejl at have forkerte frysetørringstilbehør til din lyofiliseringsproces. Har du brug for en stikprøve under dit vakuum? Derefter kræves et stopkammer. Er du frysetørrende i kolber? Så sørg for at have et tørrekammer med havne.
Ved at undgå de ovennævnte fejl kan du bedre sørge for din frysetørrer og pumpe, og få bedre prøver, når din frysetørring er færdig.
Referencer
Labconco News. "Top 5 fejl lavet i lyofiliseringsprocessen." http://www.labconco.com/news/top-5-lyophilization-mistakes