Sådan laver du denne immunhistokemiske farvestofbuffer
Fosfatbuffet saltvand (PBS) er en bufferopløsning, der almindeligvis anvendes til immunhistokemisk (IHC) farvning, og den bruges ofte i biologisk forskning. PBS er en vandbaseret saltopløsning indeholdende natriumhydrogenphosphat, natriumchlorid og i nogle tilfælde kaliumchlorid og kaliumdihydrogenphosphat.
Immunohistokemisk farvning
Immunohistokemi refererer til processen med at detektere antigener, såsom proteiner, i cellerne i en vævssektion ved anvendelse af princippet om antistoffer, der binder specifikt til antigener i biologiske væv.
Immunfluorescerende farvning var den første immunhistokemiske farvningsfremgangsmåde.
Antigener bliver synlige, når de er konjugeret med antistoffer under anvendelse af fluorescensfarvestoffer som følge af en antigen-antistofbindingsreaktion. Denne proces opstår, når den aktiveres ved spændende lys af en specifik bølgelængde under et fluorescerende mikroskop.
Osmolaritet og ionkoncentrationerne af opløsningerne svarer til menneskets krop - de er isotoniske.
En opskrift på PBS
Du kan forberede PBS på flere måder. Der er flere formler. Nogle af dem indeholder ikke kalium, mens andre indeholder calcium eller magnesium .
Denne opskrift er forholdsvis let. Det er til 10X PBS stamopløsning (0.1M). Du kan dog også lave en 1X stamopløsning, eller start med denne 10X opskrift og fortyn den til 1X.
Hele processen tager cirka 10 minutter.
Der er også mulighed for at tilføje Tween.
Hvad skal du lave PBS Buffer
- Natriumfosfat monobasisk (vandfri)
- Natriumfosfatdibasisk (vandfri)
- Natriumchlorid
- Skala og veje både
- Magnetisk omrører og omrøringsstang
- En pH-probe, der er kalibreret og passende løsninger til justering af pH
- 1L volumetrisk kolbe
- Tween 20 (valgfrit)
Hvordan man laver fosfatbuffet saltvand (PBS)
Væg 10,9 g vandfrit natriumphosphatdibasisk (Na2HPO4), 3,2 g vandfrit natriumphosphat monobasisk (NaH2PO4) og 90 g natriumchlorid (NaCl).
Opløs i lige under 1 liter destilleret vand.
Juster pH til 7,4, og opløs opløsningen op til et slutvolumen på 1L.
Fortynd 10X før brug og juster pH om nødvendigt.
Du kan lave en PBS-opløsning indeholdende 0,5 procent Tween 20 ved at tilsætte 5 ml Tween 20 til 1L opløsningen.
Tips til oprettelse af PBS buffer
Opbevar bufferen ved stuetemperatur, efter at du har lavet PBS-opløsningen.
Ikke-vandfrie reagenser kan erstattes, men du skal genberegne den passende masse af hver for at rumme de tilsatte vandmolekyler.
Anvendelser af fosfatbuffet saltvand (PBS)
Fosfatbufret saltvand har mange anvendelser, fordi det er isotonisk og ikke-giftigt for de fleste celler. Det kan bruges til at fortynde stoffer, og det bruges ofte til at skylle beholdere af celler. PBS kan anvendes som fortyndingsmiddel i forskellige metoder til tørring af biomolekyler, fordi vandmolekylerne i det vil blive struktureret omkring substansproteinet, for eksempel. Det bliver "tørret" og immobiliseret til en fast overflade.
PH forbliver stabil og konsekvent for at forhindre ødelæggelse af celler.
Den tynde film af vand, der binder til stoffet forhindrer denaturering eller andre konformationelle ændringer. Carbonatbuffere kan bruges til samme formål, men med mindre effektivitet.
PBS kan også bruges til at tage et referencespektrum ved måling af proteinadsorptionen i ellipsometri.