Denne buffer bruges til at studere DNA-bevægelse
Denne buffer har en lav ionstyrke og lav bufferingskapacitet. Det er bedst egnet til elektroforese af store (> 20 kb) stykker af DNA og skal udskiftes hyppigt eller recirkuleres i længere tid (> 4 h) gel-runetider.
Med det i tankerne vil du måske overveje flere batcher af bufferen.
I betragtning af at bufferen er nem at lave, og trinnene kan udføres hurtigt, bør det ikke være særlig tidskrævende eller vanskeligt at trække af mere end et parti ad gangen. Ved brug af instruktionerne nedenfor skal det tage kun 30 minutter at lave TAE-bufferen. Sådan er det:
Forbered en lageropløsning af EDTA
En opløsning af EDTA (ethylendiamintetraeddikesyre) fremstilles på forhånd. EDTA går ikke helt ind i en opløsning, indtil pH-værdien er indstillet til ca. 8,0. For en 500 milliliter stamopløsning på 0,5 M EDTA vejer 93,05 gram EDTA dinatriumsalt (FW = 372,2). Opløs i 400 ml deioniseret vand og juster pH med natriumhydroxid (NaOH). Opløsningen opløses til et slutvolumen på 500 ml.
Pisk op en lagerløsning af TAE
Lav en koncentreret (50x) stamopløsning af TAE ved at veje 242 gram Tris base (FW = 121,14) og opløse den i ca. 750 ml deioniseret vand.
Tilsæt forsigtigt 57,1 ml istsyre og 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8,0). Derefter justeres opløsningen til et slutvolumen på 1 liter. Denne stamopløsning kan opbevares ved stuetemperatur. PH af denne buffer er ikke justeret og bør være ca. 8,5.
Forbered en arbejdsløsning af TAE
Arbejdsløsningen af 1x TAE-buffer fremstilles ved simpelthen fortynding af stamopløsningen med 50x i deioniseret vand.
Endelige opløste koncentrationer er 40 mM. Tris-acetat og 1 mM EDTA. Bufferen er nu klar til brug ved kørsel af en agarosegel.
Hvad du behøver for bufferen
Da TAE-bufferen kun kræver et hurtigt og enkelt sæt instruktioner, er antallet af nødvendige materialer ikke overdrevet. Du skal bare bruge EDTA dinatriumsalt, Tris base og iseddikesyre.
At lave bufferen kræver også en pH-måler og kalibreringsstandarder, alt efter hvad der er relevant. Du skal også bruge 600 milliliter og 1500 milliliter bæger eller kolber samt graduerede cylindre. Endelig skal du bruge deioniseret vand, omrøringsstænger og rørplader.
Afslutter
Hvor har du planer om at lave bufferen - på et skolested, et arbejdssted eller et andet sted, f.eks. Dit hjem? Kontroller oversigten, før du begynder at sikre, at du har alle ovenstående materialer til TAE-bufferen.
Hvis du hellere ikke skal betale for materialer, anbefales det at vælge at lave buffer uden for dit hjem. Du kan nemt bestille de materialer, du har brug for online eller besøge en specialbutik til dem.