Også omtalt som RFLP-analyse, udnytter teknikken polymorfierne i de enkelte folks genetiske koder. Selv om alle medlemmer af en art har i det væsentlige samme genetiske makeup, repræsenterer disse små forskelle variationer i fænotype, såsom udseende eller metabolisme mellem individer.
RFLP: Analyse Teknik og applikationer
RFLP-analyseteknik involverer at skære en bestemt region af DNA med kendt variabilitet med restriktionsenzymer, derefter separere DNA-fragmenterne ved agarosegelelektroforese og bestemmelse af antallet af fragmenter og relative størrelser.
Et restriktionsenzym er et enzym, et proteinmolekyle, der skærer DNA på restriktionssteder. I det væsentlige opbrydes DNA-prøven og fordøjes af restriktionsenzymerne. De resulterende fragmenter adskilles i overensstemmelse med deres længder, og mønsteret af fragmentstørrelser vil variere for hver enkelt testet.
Den fulde RFLP-proces kræver sondemærkning, DNA-fragmentering, elektroforese, blotting, hybridisering, vask og autoradiografi. Det detekterede RFLP visualiseres under anvendelse af røntgenfilm i en autoradiografi, hvor DNA-fragmenter kan ses og analyseres efter at de er adskilt fra hinanden ved elektroforese.
Nogle af ansøgningerne til RFLP analyse omfatter:
- DNA fingerprinting . Retsforskere kan anvende RFLP-analyse til at identificere mistænkte på grundlag af bevisprøver indsamlet på scener af forbrydelser.
- Faderskab. RFLP bruges også til bestemmelse af fædre eller til sporing af forfædre.
- Genetisk mangfoldighed. Teknikken kan bruges til at studere evolution og migration af dyreliv, studere avlsmønstre i dyrepopulationer og i påvisning og diagnosticering af visse sygdomme.
Teknikken til at anvende RFLP-detektion af variation i genomer er et vigtigt redskab i genomkartlægning og genetisk sygdomsanalyse. Hvis placeringen af et bestemt sygdomsgen søges i et bestemt kromosom, vil forskere analysere DNA fra medlemmer af en familie med sygdommen, så se efter lignende arvsmønstre i RFLP alleler.
Når et sygdomsgen er lokaliseret, kan RFLP-analyse på andre familiemedlemmer afsløre en bærer af mutantgenene eller signalisere den samlede sygdomsrisiko. Det er vigtigt at bemærke, at RFLP-teknikken ikke anvendes i vid udstrækning nu, at nyere, mere robuste teknikker anvendes til DNA-analyse i retsmedicin og flere andre felter.
Negativt aspekt af analysen
Desværre er RFLP-analyseteknikken kedelig og langsom. Bortset fra at kræve en stor mængde prøve-DNA - ville prøven normalt være omkring kvartalet, hvilket er relativt stort for DNA-prøver - processen fra probe mærkning til vask og autoradiografi kan tage op til en fuld måned at fuldføre.
Resultater fra Human Genome Project har stort set erstattet behovet for RFLP. Projektet blev tilladt til bestemmelse af hele sekvensen af DNA fundet i humane celler, det humane genom og til identifikation af alle generne i det humane genom.